氨基磁珠偶联法解析地榆皂苷Ⅱ作用蛋白

更新时间:2023-05-28

【摘要】目的采用磁珠偶联法解析地榆皂苷Ⅱ作用蛋白。方法地榆皂苷Ⅱ具有羧基端,将其活化后,羧基端与氨基磁珠的氨基端偶联。将0、2、10 mmol·L-1地榆皂苷Ⅱ与磁珠形成配合物后,与等量TF-1细胞蛋白裂解产物共孵育,使地榆皂苷Ⅱ结合潜在作用靶蛋白;利用磁力架捕获上述磁珠,解离地榆皂苷Ⅱ的结合蛋白;经过SDS-PAGE电泳分离,采用高分辨质谱鉴定PAGE胶上的蛋白,呈现与地榆皂苷Ⅱ相结合的蛋白;通过基因本体论和京都基因与基因组百科全书数据库分析差异蛋白;通过特异性肽段数量及基于强度的绝对蛋白质定量（IBAQ）值的高低,从中筛选可信度较高的地榆皂苷Ⅱ作用蛋白。结果鉴定空白磁珠及化合物偶联磁珠结合蛋白共计226种。扣除空白磁珠结合蛋白本底,鉴定出66种地榆皂苷Ⅱ特异性作用蛋白,通过特异性肽段与IBAQ值综合分析可知:与地榆皂苷Ⅱ作用相关的蛋白主要为DNA依赖性蛋白激酶催化亚基、翻译激活剂GCN1及酰基甘油激酶等。结论利用氨基磁珠偶联法解析地榆皂苷Ⅱ的潜在作用蛋白,可为进一步阐释地榆皂苷Ⅱ及地榆的作用机制提供依据。

【关键词】 地榆 地榆皂苷Ⅱ 磁珠 靶蛋白 银染 差异蛋白 机制 基因本体论 京都基因与基因组百科全书 特异性肽段 基于强度的绝对蛋白质定量 磁珠-化合物偶联技术

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